黃曲霉毒素主要存在于谷物、堅果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些與人類血液，動物飼料相關的產品中。霉菌的生長并不一定表明黃曲毒素的存在，因為黃曲毒素只有在濕度、溫度適合及通風良好才會生成。黃曲霉素B類具有藍色熒光，G類具有綠色熒光。除了蔬菜中常見的(B1,B2,G1,G2)，還有存在喂食了有毒飼料的奶牛的牛奶中的黃曲霉素M，其中毒性最高的M的代謝物為4－羥基化的產物Bs.黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產物，也是一種強致癌物質。其危害巨大，人類日常消費食品中如牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。黃曲霉毒素的危害性在于對人及動物肝臟組織有破壞作用，嚴重時，可導致肝癌甚至死亡。毒性是砒霜的100倍其實主要是指黃曲霉毒素比砒霜毒。
目前來講，Aflatoxin M1的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)，酶聯(lián)免疫檢測法等。液相色譜法可以精確的檢測奶制品中黃曲霉毒素的微小含量。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。
高效液相色譜法：根據國標《GB 5413.37—2010》食品安全國家標準乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測定
實驗用前處理：實驗儀器和好耗材包括：恒溫水浴鍋 溶劑過濾器(帶真空泵)1000ml 高速勻質器 黃曲霉毒素免疫M1親和柱玻璃纖維濾紙 玻璃注射器 無熒光特性玻璃試管 空氣壓力泵 超聲波清洗機 定量濾紙 量筒 樣品瓶 容量瓶 移液器或移液管
實驗用試劑：色譜乙腈 色譜甲醇 氫氧化鈉 石油醚 超純水或去離子水等等
HPLC條件： 高效液相色譜儀 色譜柱 C18柱，150*4.6mm，5um 流動相 乙腈－水（25：75） 熒光檢測器： 激發(fā)波長365nm，發(fā)射波長435nm； 柱 溫 室溫 流速 1.0ml/min 進樣量 20ul 出峰時間 10分鐘左右
樣品取樣：真菌毒素分析的最大誤差來源是樣品的收集和取樣過程，所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。
樣品前處理：不同樣品
牛奶 水浴加熱至40度，離心用上清液過柱凈化；
乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品：稱取適量奶粉樣品，用于蒸餾水中，混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；
發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)：稱取適量奶粉樣品，用于蒸餾水中，調節(jié)PH值至微堿性，高速均質器勻漿，水浴加熱后離心，取上清液混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；
干酪：稱取適量切細或粉碎，過篩用加純水溶解，高速均質器勻漿，超聲提取后收集上清液，然后用石油醚進行兩次萃取，然后用適宜的有機溶液萃取，取若干上清液過柱凈化
奶粉樣品，用于蒸餾水溶解中，調節(jié)PH值至微堿性，水浴加熱后離心，取上清液混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；
奶油：稱取適量加甲醇水溶解，震蕩后分液漏斗取下層溶液，蒸干后溶于水用于過柱凈化。
免疫柱凈化步驟：完全符合GB/T 18980-2003
1、取出免疫親和層析柱, 恢復至室溫，將上方塞子取出斜剪斷，再插回親和柱上。
2、將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準確移取清澈液注入玻璃注射器；
3、將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
4、更換玻璃注射器與親和柱連接，在注射器中加入10ml水，調節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。
5、準確加入4mL色譜級乙腈洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測。
注：收集管中的洗脫液即為純化后的樣品，可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測。 HPLC 檢測需要儀器與耗材 產品名稱 說明 黃曲霉毒素M1固體標準品 參比對照使用 黃曲霉毒素M1液體標準品 濃度0.5ug/ml, 溶于乙腈 PriboFast 黃曲霉素M1免疫親和柱 用于 樣品前處理柱 分析黃曲霉素 PriboFast泵流操作架（8位） 用于免疫親和柱凈化樣品處理，方便控制流速 黃曲霉毒素檢測專用玻璃纖維濾紙 用于去除HPLC檢測時部分雜峰，有效提高靈敏度。110，1.5um 不銹鋼均質器 高速勻漿樣品，有效提高萃取效率 旋轉蒸發(fā)儀-超聲波發(fā)生器等配套設備
酶聯(lián)免疫檢測法：符合國家標準酶聯(lián)免疫檢測法采用競爭ELISA，在微孔板上預包被黃曲霉毒素B1抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素M1標準品溶液）及辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標準品溶液中的黃曲霉毒素M1與預包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結合辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。未結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負相關。對照標準曲線，即可得出相應殘留物黃曲霉毒素M1的含量。
樣品處理牛奶 直接離心取上清液用于檢測奶粉及其他固狀奶制品：需要溶解于去離子水中，乳脂離心機離心取上清液用于檢測試劑盒檢測時間：30分鐘＋30分鐘交叉反應率： Aflatoxin M1 100% Aflatoxin B1 8% Aflatoxin B2 10% Aflatoxin G1 7% Aflatoxin G2 5% ELISA 方法檢測需要： 說明 PriboFast 黃曲霉毒素M1酶聯(lián)免疫檢測試劑盒 96T 檢測范圍 (0.1 ppb －8.1ppb) 移液器（彩色） 多個量程：0.5-10; 20-200; 5-50; 1000-5000ul 八道半支滅菌移液器 量程： 5-50ul; 50-300ul 酶標儀等 進口、國產儀器， PriboFast試劑盒采用直接競爭法，檢測時間短，步驟簡單，性能穩(wěn)定，檢測限符合國標要求。
對分析人員要求：化學分析儀器及其相關專業(yè)或有高效液相色譜儀操作經驗的人員均可很快掌握黃曲霉毒素M1檢測技術。
掃我聯(lián)系