通過實驗室離心機采用差速離心法來分離細胞內(nèi)的各種成分，從而到達了解細胞核和線粒體并進行鑒定的目的。
離心是一種利用旋轉(zhuǎn)運動的離心力以及物質(zhì)的沉降系數(shù)或浮力密度的差異進行分離、濃縮和提純的方法。實驗室離心機的離心技術(shù)已在細胞分離實驗過程中廣泛應用。進行細胞培養(yǎng)時，常規(guī)需要進行制備細胞懸液、調(diào)整細胞密度、洗滌、收集細胞等工作，通常需要使用實驗室離心機。一般可常規(guī)配置4000rpm的國產(chǎn)臺式離心機，例如細胞沉降，使用低速離心機即可，離心力過大有時可能引起細胞的損傷。
分離純化的方法有2種：主要包括差速離心、密度梯度離心等。
差速離心：
差速離心主要是采取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細胞。開始離心的速度較低，讓較大的顆粒沉降到管底，小的顆粒仍然懸浮在上清液中。收集沉淀，改用較高的離心速度離心懸浮液，將較小的顆粒沉降，以此類推，達到分離不同大小顆粒的目的。
密度梯度離心：
·當顆粒之間存在沉降系數(shù)差時，在一定的離心力作用下，顆粒以一定速度沉降在不同的密度梯度區(qū)域中形成區(qū)帶的方法。
·用兩種濃度的蔗糖溶液制成的梯度，離心機離心后，線粒體和比它沉降系數(shù)小的細胞成分聚集在梯度交界處，而沉降系數(shù)較大的細胞組分沉到離心管的底部。
動物肝細胞勻漿制備實驗:
（1）取出肝臟（2g左右），先用清水沖洗干凈后，放在置于冰塊上的培養(yǎng)皿中用剪刀剪成小塊，去除結(jié)締組織，用生理鹽水反復洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。
（2）加入10mL預冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化鈣溶液
（3）將懸浮的肝組織液倒入組織搗碎機中進行搗碎，直至沒有可見的組織塊為止。
（4）將肝組織搗碎液分裝在50ml離心管中，實驗室離心機1500rpm 4°下離心2min (去除大組織塊)。
用差速離心法分離細胞勻漿中的各種細胞組分：
常用介質(zhì)(高溶解性的惰性物質(zhì)):氯化艷、蔗糖、多聚蔗糖。
在整個實驗過程中除了按規(guī)定操作外，要格外注意離心機的使用安全，并盡可能的充分分割肝組織，縮短勻漿時間，整個分離過程不宜過長，以保持組分生理活性。
掃我聯(lián)系