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臺(tái)式低速離心機(jī)提取牛血清白蛋白實(shí)驗(yàn)

2016/3/8 16:01:05??????點(diǎn)擊:
一、 實(shí)驗(yàn)原理:
帶點(diǎn)粒子在電場(chǎng)中移動(dòng)的現(xiàn)象為電泳。通過(guò)電泳技術(shù)對(duì)蛋白的提取,在醋酸纖維素薄膜分離出血清蛋白中的各種蛋白。
二、 實(shí)驗(yàn)步驟:
1、鹽析: 取小牛血清0.5毫升+PBS液0.5毫升+飽和硫酸銨2.3毫升,充分混勻,靜止20分鐘,臺(tái)式低速離心機(jī)2500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。
2、透析:取玻璃紙一張,折成袋形,將離心后的上清液倒入袋內(nèi),用線扎緊上口(注意要留有空隙),放入裝有自來(lái)水的小燒杯中透析,要不斷振動(dòng),每隔2分鐘換一次水,共換水15次。
3、電泳:
 1)點(diǎn)樣
     取一張膜條,將膜條無(wú)光澤面向下,放入培養(yǎng)皿中得巴比妥緩沖液中使膜條侵透,取出,用玻璃紙吸干,以薄膜的無(wú)光澤面距一端1.5厘米處做點(diǎn)樣線,將牛血清樣品與待測(cè)的牛血清白蛋白溶液分別用點(diǎn)樣器在同一張薄膜的點(diǎn)樣線處不同位置點(diǎn)樣。
2)電泳
     將點(diǎn)樣后的膜條置于電泳槽架上,放置時(shí)無(wú)光澤面向下,點(diǎn)樣端置于陰極,平衡5分鐘,開(kāi)電源160伏60分鐘,關(guān)閉電源后用鑷子將膜條取出。
3)染色
   將膜條直接浸于盛有氨基黑10B的染料中,染2分鐘取出,立即浸于漂洗液中,分別在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5分鐘,直至背景漂洗干凈為止。
4.觀察結(jié)果
     比較樣品與待測(cè)液中白蛋白在薄膜上的電泳結(jié)果。
? 實(shí)驗(yàn)儀器:離心管、離心機(jī)、試管、玻璃紙、燒杯、滴管、玻璃棒、電泳儀、醋酸纖維素薄膜、分光光度計(jì)。

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